Stéréologie fondée sur le plan d'échantillonnage et histomorphométrie sur image binaire dans l'évaluation des nerfs

Le rôle du logiciel Clemex dans cette étude

Clemex Vision a été utilisé pour détecter les nerfs séparément des profils non nerveux de l'arrière-plan. Le logiciel a pu mesurer l'aire de chaque composante — la myéline (en bleu) et l'axone (en magenta). En combinant les deux couleurs dans un autre plan binaire, le logiciel a aussi pu mesurer la largeur totale de la fibre ainsi que l'aire de l'axone + myéline. L'ajout d'autres paramètres de mesure, comme le diamètre circulaire, le rapport de forme ou la rugosité, se fait facilement dans le logiciel.

Auteurs : Daniel A. Hunter, Deng Pan, Matthew D. Wood, Alison K. Snyder-Warwick, Amy M. Moore, Eva L. Feldman, Susan E. Mackinnon, Michael J. Brenner

Résumé

Contexte : La stéréologie et l'histomorphométrie sont largement utilisées par les chercheurs pour quantifier les caractéristiques des nerfs dans des états normaux et pathologiques, y compris les lésions nerveuses et la régénération. Bien que ces méthodes d'analyse soient complémentaires, aucune étude n'a à ce jour comparé systématiquement les deux approches sur le nerf périphérique. Cette étude a examiné la fiabilité de la stéréologie fondée sur le plan d'échantillonnage par rapport à l'histomorphométrie semi-automatisée sur image binaire pour évaluer les caractéristiques d'un nerf périphérique sain.

Nouvelle méthode : L'analyse stéréologique a été comparée à l'histomorphométrie par analyse d'image binaire sur des nerfs sciatiques non lésés afin de déterminer le nombre de fibres nerveuses, l'aire du nerf, la densité neuronale et la distribution des fibres.

Résultats : Des nerfs sciatiques ont été prélevés sur 6 rats Lewis mâles, âgés de 8 à 12 semaines, pour une analyse complète de 6 échantillons de nerf. Pour chaque animal, les échantillons de nerf sciatique ont été fixés, colorés et sectionnés en vue d'une analyse par microscopie optique et électronique. Les analyses histomorphométriques et stéréologiques du nerf périphérique ont été réalisées sur tous les échantillons par deux investigateurs indépendants et en aveugle, qui ont quantifié le nombre de fibres nerveuses, la largeur des fibres, la densité et les paramètres de distribution associés.

Comparaison avec les méthodes existantes : L'histomorphométrie et l'analyse stéréologique ont donné des résultats similaires pour le nombre de fibres nerveuses et l'aire totale du nerf. Cependant, l'analyse stéréologique en microscopie optique — mais pas en microscopie électronique — a donné une aire de fibres nerveuses plus élevée que l'histomorphométrie ou la mesure manuelle.

Conclusion : Les deux méthodes mesurent un nombre de fibres et une aire totale de fibres nerveuses similaires; toutefois, la stéréologie en microscopie optique a quantifié une aire de fibres plus élevée. L'histomorphométrie optimise le débit et la complétude de l'analyse, mais exige un seuillage par l'utilisateur.

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